PCR en temps réel

Evolution de la PCR, la technique de PCR en temps réel, maîtrisée par Scanelis depuis 2000, permet de détecter des séquences génétiques caractéristiques de l’agent à rechercher. Tous les tests développés et commercialisés par Scanelis utilisent la technique de PCR en temps réel (PCR quantitative).

Principe de la PCR en temps réel

Comme en PCR, deux amorces (oligonucléotides d’environ 20 bases) spécifiques du fragment à rechercher et situées à chaque extrémité de la cible sont utilisées comme "têtes chercheuses".
Une sonde marquée, également spécifique de la séquence cible et interne par rapport aux deux amorces, est ajoutée au milieu réactionnel. Les fragments amplifiés sont mis en évidence au fur et à mesure des cycles de la réaction.
Il est également possible d’utiliser un intercalant de l’ADN à la place de la sonde pour révéler l’amplification mais ces méthodes, moins coûteuses en réactifs sont également moins spécifiques (typage délicat voire impossible).

Vous pouvez consulter notre animation "La PCR en temps réel".

Avantages majeurs par rapport aux méthodes de PCR conventionnelle

• Analyse quantitative des résultats si nécessaire
• Typage des souches en utilisant des sondes fluorescentes spécifiques (ex : souches vaccinales/ souches de terrain)
• Reproductibilité
• Sensibilité très importante
• Sécurité du résultat (pas de risque de contamination et de faux positifs en raison de l’absence d’analyse par électrophorèse)
• Automatisation de l’analyse

Le développement de tests PCR quantitative/PCRtemps réel demande une réelle expertise biomoléculaire.